肝脏样本提取效率测试

检测项目

总RNA提取效率：评估从单位质量肝脏样本中提取的总RNA产量，是衡量提取完整性的基础指标。

总DNA提取效率：测定从肝脏组织中获得的总基因组DNA的浓度与总量，反映DNA提取方法的有效性。

microRNA提取效率：专门针对小分子RNA（如miRNA）的得率进行检测，评估方法对小RNA的富集能力。

蛋白质提取效率：测量从肝脏匀浆中提取的总蛋白量，是蛋白质组学分析的前提。

核酸纯度（A260/A280）：通过吸光度比值判断提取的核酸中蛋白质、酚等污染物的残留程度。

核酸纯度（A260/A230）：通过吸光度比值评估核酸样品中盐类、胍盐、碳水化合物等杂质的污染情况。

RNA完整性指数（RIN）：使用生物分析仪对提取的RNA进行电泳分析，定量评估RNA的降解程度。

DNA片段化分析：检测提取的基因组DNA是否发生非特异性断裂，评估其完整性与大小分布。

功能性蛋白得率：通过特定活性测定（如酶活）评估所提蛋白质是否保持其天然生物活性。

线粒体DNA/核DNA比例：评估提取方法对不同细胞器DNA的获取能力，常用于特定研究领域。

检测范围

新鲜肝组织：直接从实验动物或临床手术获取的新鲜样本，是提取效率测试的金标准材料。

冰冻肝组织：液氮速冻后长期保存的样本，测试方法对冻存样本的适用性与效率。

石蜡包埋肝组织：福尔马林固定石蜡包埋的存档样本，测试方法从高度交联组织中回收核酸的能力。

不同物种肝脏：涵盖小鼠、大鼠、兔、犬、非人灵长类及人类等不同物种的肝脏样本。

病理状态肝组织：包括脂肪肝、纤维化、肝硬化、肝癌等病变组织，测试方法对复杂基质的适应性。

微量肝组织：针对穿刺活检等获得的毫克级甚至更少的微量样本进行提取效率验证。

单细胞悬液：由肝脏组织消化制备的单细胞悬液，用于评估从单个细胞中提取分子的效率。

细胞核与细胞质组分：对分级分离后的亚细胞组分分别进行提取效率测试。

外泌体与囊泡：从肝脏组织或培养上清中分离的外泌体等细胞外囊泡，测试其内容物提取效率。

不同保存液中的样本：测试保存在RNAlater、DNA/RNA Shield等专用保存液中的样本提取效果。

检测方法

酚-氯仿抽提法：经典的有机溶剂萃取法，作为基准方法用于比较新方法的提取效率与纯度。

柱膜法纯化：基于硅胶膜或玻璃纤维膜的离心柱技术，评估其操作简便性、回收率与一致性。

磁珠法提取：使用表面修饰的磁性微粒进行靶向吸附分离，测试其自动化兼容性与高通量性能。

研磨均质化效率测试：比较不同研磨方式对组织破碎的彻底性，及其对后续提取效率的影响。

酶消化法：使用蛋白酶K消化组织以释放核酸，评估不同消化条件对得率和完整性的优化作用。

分光光度法：使用紫外-可见分光光度计测量核酸或蛋白的浓度与纯度比值。

荧光定量法：利用荧光染料（如PicoGreen, Qubit）特异性结合核酸，进行高灵敏度定量。

：通过生物分析仪进行自动化电泳，精确分析核酸的完整性、大小分布及浓度。

SDS-PAGE与Western Blot：用于评估蛋白质提取的完整性、特异性及是否存在降解。

实时荧光定量PCR验证：使用看家基因或特定靶标进行qPCR扩增，从功能角度验证核酸的提取质量与可扩增性。

检测仪器设备

紫外分光光度计：用于快速测定核酸和蛋白质的浓度以及A260/A280、A260/A230纯度比值。

荧光分光光度计/Qubit仪：配备特异性荧光染料，实现对痕量核酸的高特异性、高灵敏度定量。

：基于微流控芯片电泳技术，提供RNA完整性指数及DNA片段大小分布的精确数据。

：通过扩增效率与Ct值，功能性验证所提核酸的质量及其对下游应用的适用性。

：包括珠磨式、刀头式、超声破碎式等，用于将肝脏组织高效破碎为均一匀浆。

：用于样本沉淀、相分离、柱纯化过程中的离心步骤，确保分离效果。

：可同时测量核酸和蛋白浓度的小型化设备，适用于快速筛查多个样本。

：实现从组织裂解到纯化的全流程或部分流程自动化，测试其提取的一致性与通量。

：包括琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳设备，用于直观判断核酸和蛋白质的完整性。

：包括-80°C冰箱、液氮罐等，确保待测样本与提取产物的长期稳定保存，避免降解影响测试结果。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件