假丝酵母转录组学分析

检测项目

总RNA提取与质量评估：采用专用试剂盒从假丝酵母细胞中分离完整的总RNA，并通过微量分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测其浓度、纯度及完整性，确保样本质量符合后续建库要求。

mRNA富集与纯化：利用寡核苷酸探针与真核生物mRNA的polyA尾特异性结合特性，从总RNA中分离纯化信使RNA，去除核糖体RNA等非目标组分，提高转录本测序效率。

cDNA文库构建：以纯化的mRNA为模板，通过逆转录酶合成双链cDNA，随后进行末端修复、加A尾并连接测序接头，构建适用于高通量测序平台的标准化文库。

文库质量检测与定量：应用高灵敏度荧光染料或qPCR技术对构建完成的cDNA文库进行精确定量，并利用生物分析仪检测文库片段大小分布，确保文库浓度及片段范围符合上机测序标准。

高通量测序：采用第二代测序平台对cDNA文库进行大规模并行测序，生成覆盖全转录组的原始读长序列数据，通常获得数百万至数亿条高质量读长。

原始数据质量控制：对下机原始序列数据进行质量评估，包括碱基质量分布、GC含量、序列重复率及接头污染检查，过滤低质量读长以确保后续分析的准确性。

参考基因组比对：将高质量测序读长与假丝酵母参考基因组序列进行比对定位，计算各基因的覆盖度及比对率，评估样本与参考基因组的匹配程度。

基因表达水平定量：基于比对结果统计映射到每个基因外显子区域的读长数目，采用FPKM或TPM等方法标准化处理，量化不同样本中各个基因的表达丰度。

差异表达基因分析：通过统计学模型比较不同实验条件下基因表达水平的显著性变化，筛选满足设定阈值的变化倍数和校正后P值的差异表达基因列表。

GO功能富集分析：对差异表达基因集合进行基因本体论注释，通过超几何检验等方法识别显著富集的生物学过程、分子功能及细胞组分类别。

KEGG通路富集分析：将差异表达基因映射至KEGG代谢通路数据库，分析其在特定生化通路和信号转导网络中的富集情况。

可变剪切事件分析: 检测同一基因在不同条件下产生的多种转录本异构体,识别外显子跳跃、内含子保留等可变剪切事件及其调控模式。

新转录本预测: 基于未被注释基因组区域的高覆盖度读长比对信息,运用生物信息学算法预测可能存在的新的编码或非编码RNA转录本。

检测范围

临床分离株致病性研究: 针对从患者样本中分离的假丝酵母菌株,分析其毒力因子表达谱,探究与侵染宿主和组织定植相关的分子基础。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件