基因表达水平测试

检测项目

总RNA提取与质量评估：采用酚氯仿法或硅胶膜吸附法分离样本中的总RNA，通过微量分光光度计测定A260/A280比值及A260/A230比值，评估RNA纯度及是否存在蛋白质或有机溶剂污染。

RNA完整性检测：使用琼脂糖凝胶电泳或微流控芯片分析系统对RNA进行电泳分离，观察28S/18S核糖体RNA条带JianCe度与比例，判断RNA降解程度是否符合后续实验要求。

基因组DNA残留检测：通过无逆转录酶的阴性对照实验，利用定量PCR技术扩增看家基因片段，确认RNA样本中是否含有影响定量结果的基因组DNA污染。

cDNA合成效率验证：以不同浓度梯度标准品为模板进行反转录反应，比较Ct值变化曲线，评估逆转录酶将RNA转化为cDNA的转化率及线性范围。

引物特异性检验：通过熔解曲线分析实时荧光定量PCR产物的单一峰形特征，并结合琼脂糖凝胶电泳验证扩增条带大小是否符合预期目标片段长度。

标准曲线建立与线性评估：将已知浓度的标准品进行系列稀释后扩增，以Ct值为纵坐标、模板对数值为横坐标绘制标准曲线，要求相关系数R大于0.98。

内参基因稳定性筛选：利用geNorm或NormFinder算法分析多个候选内参基因在不同实验条件下的表达变异系数，选择表达最稳定的基因作为标准化参照。

绝对定量分析：通过比对待测样本与标准品的Ct值差异，根据标准曲线方程计算特定转录本在单位质量或细胞数量中的精确拷贝数。

相对定量分析：采用2^(-ΔΔCt)计算方法，以对照组为基准标准化目标基因表达量，获得实验组与对照组间的基因表达倍数变化关系。

差异表达基因筛选：设置统计学显著性阈值（如foldchange≥2且P值<0.05），通过多重假设检验校正后识别不同处理组间具有显著表达差异的基因集合。

检测范围

临床组织标本检测:适用于手术切除的肿瘤组织、活检穿刺样本等人体组织材料，需在离体后快速低温保存以防止RNA降解。

细胞系模型分析:涵盖原代培养细胞、永生化细胞系及转基因细胞模型，需控制传代次数与培养条件以保证基因表达谱稳定性。

血液样本检测:针对外周血单个核细胞、血浆游离RNA等血液衍生成分，需特殊处理防止血红蛋白对PCR反应的抑制效应。

植物组织表达谱研究:适用于叶片、根系、果实等植物器官，需采用改良提取方案克服多糖多酚类物质对RNA分离的干扰。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件