心肌纤维化模型检测

因业务调整，部分个人测试暂不接受委托，望见谅。

检测项目

心肌胶原容积分数（CVF）：通过天狼星红染色定量心肌组织中胶原纤维占比，检测范围0~100%，计算精度±1%。

Ⅰ型胶原蛋白（Col-Ⅰ）表达水平：采用免疫组化法测定心肌组织中Col-Ⅰ蛋白分布及含量，阳性面积百分比测量精度±2%。

Ⅲ型胶原蛋白（Col-Ⅲ）mRNA水平：通过qPCR技术检测心肌组织中Col-Ⅲ基因转录水平，相对定量误差±5%。

转化生长因子-β1（TGF-β1）浓度：采用ELISA法测定血清或心肌组织匀浆中TGF-β1含量，检测范围10~1000pg/mL，最低检出限5pg/mL。

基质金属蛋白酶-2（MMP-2）活性：通过明胶酶谱法分析心肌组织中MMP-2的酶解活性，条带密度分析精度±3%。

金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）表达：采用Western blot法检测心肌组织中TIMP-1蛋白含量，灰度值定量误差±4%。

心肌成纤维细胞（CFs）增殖率：通过CCK-8法测定体外培养CFs的增殖能力，检测范围0.1~10OD值，重复性CV≤5%。

心肌组织羟脯氨酸含量：采用比色法测定心肌组织中羟脯氨酸浓度，检测范围5~100μg/mg蛋白，回收率90%~110%。

心肌细胞凋亡率：通过流式细胞术检测心肌组织中凋亡细胞比例，荧光染色信噪比≥10:1，检测精度±1%。

左心室射血分数（LVEF）：采用超声心动图测定模型动物左心室收缩功能，测量范围30%~80%，误差±2%。

心肌组织纤维化面积比：通过Masson三色染色定量纤维化区域占心肌组织总面积的比例，计算精度±1%。

纤维化相关microRNA（miR-21）表达：采用qPCR技术检测心肌组织中miR-21的相对表达量，Ct值变异系数≤3%。

Smad3蛋白磷酸化水平：采用Western blot法检测心肌组织中p-Smad3/Smad3比值，反映TGF-β1信号通路激活程度，灰度值比值误差±5%。

心肌组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达：采用免疫荧光法测定心肌成纤维细胞活化标记物α-SMA的阳性细胞比例，检测精度±1%。

检测范围

动物模型：包括小鼠、大鼠、兔等实验动物的心肌纤维化模型，如主动脉缩窄模型、异丙肾上腺素诱导模型、醛固酮输注模型等。

细胞模型：体外培养的心肌成纤维细胞（CFs）纤维化模型，如TGF-β1诱导的CFs活化模型、AngⅡ刺激的CFs增殖模型。

药物干预模型：评估药物对心肌纤维化的抑制或逆转作用的模型，如抗纤维化药物（如吡非尼酮）治疗后的动物模型、中药提取物干预的细胞模型。

基因修饰模型：基因敲除或过表达的心肌纤维化模型，如TGF-β1转基因小鼠模型、Smad3 knockout模型、miR-21抑制剂处理的细胞模型。

缺血性心肌病模型：心肌梗死术后心肌纤维化模型，如冠状动脉结扎诱导的大鼠心肌纤维化模型、微创球囊封堵诱导的小鼠心肌梗死模型。

非缺血性心肌病模型：如扩张型心肌病（DCM）伴发的心肌纤维化模型、肥厚型心肌病（HCM）心肌间质纤维化模型。

代谢性心肌病模型：糖尿病或肥胖诱导的心肌纤维化模型，如db/db小鼠心肌纤维化模型、高脂饮食诱导的大鼠心肌纤维化模型。

毒性诱导模型：化疗药物（如阿霉素、表阿霉素）或重金属（如镉、铅）诱导的心肌纤维化模型，如阿霉素腹腔注射诱导的小鼠心肌纤维化模型。

炎症性心肌病模型：自身免疫性心肌炎伴发的心肌纤维化模型，如实验性自身免疫性心肌炎（EAM）模型、柯萨奇病毒B3感染诱导的心肌纤维化模型。

衰老相关模型：老年动物自然发生的心肌纤维化模型，如18-24月龄C57BL/6小鼠心肌纤维化模型、24月龄大鼠心肌间质纤维化模型。

体外3D模型：三维培养的心肌组织纤维化模型，如组织工程心肌片层纤维化模型、微流控芯片构建的3D心肌纤维化模型。

临床样本：人类心肌纤维化患者的心肌组织或血清样本，用于纤维化 biomarker（如Col-Ⅰ、TGF-β1）的验证及相关性分析。

检测标准

ISO 15189:2022 医学实验室质量和能力要求：适用于心肌纤维化模型检测实验室的质量控制和能力评估。

GB/T 22286-2008 动物源性食品中羟脯氨酸含量的测定：用于心肌组织羟脯氨酸含量检测的方法学参考。

ASTM E1398-18 流式细胞术检测细胞凋亡的标准指南：适用于心肌细胞凋亡率的检测。

GB/T 38477-2020 实时荧光定量PCR检测方法通则：用于纤维化相关基因（如Col-Ⅰ、miR-21）的表达分析。

ISO 20186-1:2019 分子体外诊断检查—核酸扩增法—第1部分：通用要求：适用于qPCR检测的质量控制。

GB/T 16129-2012 动物心电图检测方法：用于模型动物心脏功能（如LVEF）的超声心动图辅助评估。

ASTM F3169-18 组织工程医疗产品—细胞活性和增殖的测定：适用于心肌成纤维细胞增殖率的检测。

GB/T 27403-2008 实验室质量控制规范—动物实验：用于动物模型检测的实验操作规范。

ISO 17025:2017 检测和校准实验室能力的通用要求：适用于心肌纤维化模型检测实验室的整体能力评估。

GB/T 19495.5-2018 转基因生物检测—核酸定性PCR检测方法：用于基因修饰模型的基因型鉴定。

ASTM E2149-16 免疫组化染色法检测组织中蛋白表达的标准指南：适用于Col-Ⅰ、α-SMA等蛋白的表达检测。

GB/T 21767-2008 动物组织病理学检查规程：用于心肌组织形态学检测的操作规范。

检测仪器

天狼星红染色系统：包括染色液、正置显微镜及图像分析软件，用于心肌胶原容积分数（CVF）的定量分析，可自动识别胶原纤维（红色）与心肌细胞（黄色），计算胶原占比。

实时荧光定量PCR仪：具备多通道（FAM、VIC、ROX等）检测功能，支持96孔板高通量检测，用于纤维化相关基因（如Col-Ⅰ、miR-21、TGF-β1）的mRNA表达水平检测，相对定量采用ΔΔCt法，绝对定量采用标准曲线法。

酶联免疫吸附测定（ELISA）仪：具备450nm、570nm双波长检测功能，支持单通道或多通道同时检测，用于血清、血浆或组织匀浆中纤维化相关因子（如TGF-β1、TIMP-1、PDGF）的浓度测定，检测范围10~1000pg/mL，最低检出限≤5pg/mL。

流式细胞仪：具备荧光激发（488nm、633nm）及检测功能，支持Annexin V/PI双染色法，用于心肌细胞凋亡率的检测，可区分凋亡细胞（Annexin V+PI-）、坏死细胞（Annexin V+PI+）及正常细胞（Annexin V-PI-），检测精度±1%。

超声心动图仪：具备高频探头（15~20MHz）及多普勒功能，支持M型、B型及脉冲多普勒成像，用于模型动物（如小鼠、大鼠）左心室射血分数（LVEF）、短轴缩短率（FS）的测定，实时显示心脏结构（如心室壁厚度、心腔大小）及功能参数，测量误差±2%。

明胶酶谱分析系统：包括垂直电泳仪、凝胶成像系统及分析软件，用于心肌组织中基质金属蛋白酶（如MMP-2、MMP-9）活性的检测，通过明胶凝胶电泳分离酶蛋白，酶解后显示透明条带，条带密度与酶活性成正比，分析精度±3%。

比色法检测仪：具备可见光（550nm）吸收检测功能，支持微孔板或 cuvette 检测，用于心肌组织羟脯氨酸含量的测定，通过羟脯氨酸与氯胺T、对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物，颜色深浅与浓度线性相关，检测范围5~100μg/mg蛋白，回收率90%~110%。

Western blot系统：包括SDS-PAGE电泳仪、半干转膜仪、化学发光显影系统，用于纤维化相关蛋白（如TIMP-1、Smad3、α-SMA）的表达水平检测，通过抗体特异性结合目标蛋白，化学发光显影后计算灰度值，定量误差±4%。

免疫荧光显微镜：具备荧光激发（405nm、488nm、561nm）及共聚焦功能，用于心肌组织中α-SMA、Col-Ⅰ的定位及表达检测，可观察成纤维细胞活化状态及胶原分布，分辨率≤0.2μm。

细胞计数仪：具备台盼蓝染色功能，支持自动细胞计数及活力分析，用于心肌成纤维细胞（CFs）增殖率的辅助检测，计数范围1×10^4~1×10^6 cells/mL，活力检测精度±1%。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件