蛋白质印迹定量分析检测

因业务调整，部分个人测试暂不接受委托，望见谅。

检测项目

目标蛋白相对定量：采用内参蛋白校正，定量精度达±5%，线性范围10pg-1μg

灰度值分析：通过成像系统测量条带光密度，分辨率0.01OD/mm²

分子量校准：使用预染蛋白Marker，误差范围±2kDa

表达丰度比：计算靶蛋白/内参蛋白比值，重复性CV≤8%

跨膜效率验证：转印后Ponceau S染色评估，转移率≥95%

非特异性结合率：封闭后背景信号控制，信噪比≥10:1

抗体效价测试：确定最佳一抗稀释度（1:500-1:5000）

化学发光动力学：ECL底物发光强度监测，动态范围104倍

条带线性回归：校准曲线R²值≥0.98

批次间差异分析：三批次样本RSD≤12%

膜上蛋白回收率：Bradford法测定，回收率85%-115%

磷酸化位点定量：磷酸化抗体检测，特异性验证≥90%

检测范围

血清生物标志物：心肌肌钙蛋白I定量检测，检测限0.1ng/mL

肿瘤组织裂解液：HER2受体表达水平分析，样本量≥20mg

细胞信号通路蛋白：MAPK/AKT通路磷酸化状态监测

转基因表达产物：重组蛋白在CHO细胞中的表达效率

病原体抗原检测：病毒衣壳蛋白在感染组织中的分布

神经退行标志物：脑脊液tau蛋白及Aβ42定量

药物靶点表达：GPCR受体在膜蛋白组分的丰度

植物胁迫响应蛋白：干旱诱导蛋白在叶绿体的表达

融合蛋白验证：His-tag重组蛋白纯度≥90%

凋亡相关因子：caspase-3活化片段检测

细胞周期调控蛋白：Cyclin B1在同步化细胞的表达

表观遗传修饰：组蛋白乙酰化位点定量分析

检测标准

ISO 19001:2018 免疫印迹定量分析通则

ISO 13485:2016 体外诊断试剂生产质量管理规范

GB/T 35552-2017 蛋白质免疫印迹检测方法

ASTM E3106-17 印迹膜性能评估标准指南

GB/T 27417-2017 合格评定 化学分析方法验证通则

YY/T 1579-2018 肿瘤个体化治疗相关基因突变检测试剂盒

CLSI EP05-A3 定量测量精密度验证方案

GB 4789.40-2016 食品微生物学检验 蛋白质免疫印迹法

IEC 61010-2-101 实验室设备安全规范

ISO 15189:2022 医学实验室质量和能力要求

检测仪器

垂直电泳系统：配置10-20孔梳齿，电压范围50-300V，实现蛋白按分子量精确分离

半干式转印仪：恒流转印装置（0.8-3mA/cm²），支持PVDF/NC膜转移

化学发光成像系统：16bit冷CCD相机，检测灵敏度0.5pg/band

微量分光光度计：紫外/可见双光束扫描，样品体积1μL定量

条带分析软件：自动背景扣除功能，支持分子量/灰度值同步分析

恒温摇床：转速50-500rpm可调，温控范围4-50℃

膜封闭孵育箱：湿度控制±3%，温度均匀性±0.5℃

自动洗膜机：八通道独立控液，流速精度±5%

预染蛋白Marker：10-250kDa十二色荧光标记，抗转移降解

化学发光底物自动分配器：加样精度±1μL，避免底物氧化

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件