猪瘟病毒检测

因业务调整，部分个人测试暂不接受委托，望见谅。

检测项目

实时荧光PCR检测：用于病毒核酸定量检测，灵敏度达1copy/μL，循环阈值(Ct值)设定为≤40，扩增目标为B646L基因片段。

酶联免疫吸附试验(ELISA)：检测血清抗体或抗原，OD值范围0.1-3.0，临界值计算基于阴性对照均值加三倍标准差。

病毒分离培养：在猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中进行，观察细胞病变效应(CPE)，培养周期5-7天，病毒滴度测定用TCID50法。

免疫组织化学(IHC)：分析组织切片抗原表达，使用特异性单克隆抗体，显色反应时间10分钟，阳性信号强度分级为0-4+。

核酸序列分析：通过Sanger测序确认病毒基因组，靶序列BP602R区域，比对相似度≥95%判定为阳性。

血吸附试验(HA)：检测红细胞凝集活性，滴度≥1:8为阳性，使用0.5%猪红细胞悬液。

快速免疫层析试纸：野外筛查应用，检测限10^4病毒粒子/mL，结果读取时间15分钟，显色带强度判读标准。

环境样本PCR：检测土壤或水体污染，DNA提取效率≥80%，内控基因β-actin用于质控。

血清中和试验：评估抗体中和能力，稀释度1:16起测，中和指数计算方法。

病理组织学检查：显微镜观察脾脏坏死灶，H&E染色切片，病灶面积百分比≥20%判为阳性。

气相色谱-质谱联用分析：检测病毒脂质标志物，保留时间误差±0.1min，特征离子峰m/z 300定量。

电镜病毒形态鉴定：负染色样品，放大倍数50,000X，病毒粒径测量范围170-190nm。

检测范围

生猪组织样本：包括脾脏、淋巴结和肝脏，用于病理和病毒分离检测，确保标本新鲜冷藏运输。

血液和血清样品：采集EDTA抗凝血或离心血清，适用于PCR和ELISA抗体筛查。

饲料和饮水样本：监控潜在污染源，采样量≥500g，检测病毒残留风险。

环境表面拭子：从养殖场栏舍、车辆表面采集，棉拭浸泡PBS缓冲液，样本体积5mL。

肉及肉制品：进出口检疫重点，选择肌肉或内脏部位，评估热处理后病毒灭活率。

野生动物媒介：如野猪或蜱虫样本，监测自然宿主传播链，采样地域覆盖森林区。

运输工具消毒残留：卡车轮胎或集装箱表面，检测消毒剂杀灭效果后残留病毒。

精液和胚胎生物材料：人工授精安全检测，冷冻保存样本解冻后分析。

疫苗制品：灭活或弱毒疫苗的质量控制，验证无活病毒污染。

消毒剂效能测试：评估次氯酸钠或醛类消毒剂，接触时间10分钟后病毒滴度下降log值。

空气悬浮颗粒物：使用空气采样器捕获，检测气溶胶传播风险，采样流量20L/min。

废水处理样本：市政或农场废水，浓缩后检测病毒载量，评估环境扩散。

检测标准

依据OIE陆生动物手册第3.9.1章非洲猪瘟病毒检测规程，涵盖诊断方法和报告要求。

ISO16140-5:2020微生物方法验证标准，用于PCR和ELISA实验室间比对验证。

ISO17025实验室能力认可规范，确保检测过程质量管理与控制。

GB/T18648-2020动物疫病诊断技术通则，规定样本采集和保存条件。

GB/T35912-2018非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法，限定引物序列和反应参数。

GB/T36894-2018血清学试验标准，包括ELISA板包被抗原纯度要求。

ISO15216-1食品微生物检测指南，适用于肉制品病毒筛查。

GB/T19915.3-2005动物疫病实验室生物安全规范，定义BSL-3级操作要求。

ISO7218微生物学通用规则，涉及培养基和试剂质量控制。

ASTM F3350-21环境表面采样标准，指导拭子采集和处理协议。

OIE水生动物手册相关章节，扩展至水生环境样本检测。

检测仪器

实时荧光PCR仪：基于TaqMan探针技术，支持96孔板高通量检测，功能包括病毒DNA扩增和Ct值实时分析。

酶标仪：光度计读取ELISA板吸光度，波长范围450nm±10nm，功能为自动计算OD值和临界比。

生物安全柜：Class II型垂直层流设计，气流速度0.5m/s，功能为提供无菌环境处理感染样本。

高速冷冻离心机：转速达15,000rpm，温度控制-20°C至40°C，功能为分离血清或浓缩病毒颗粒。

显微镜：配备荧光模块和摄像系统，放大倍数400X-1000X，功能为观察组织切片抗原定位。

核酸提取仪：磁珠法自动纯化DNA，处理通量48样本/批，功能为高效提取病毒核酸减少污染。

电镜系统：透视电子显微镜，分辨率0.1nm，功能为直接观察病毒形态和结构特征。

恒温培养箱：温度精度±0.5°C，范围25°C-40°C，功能为维持细胞培养病毒分离所需条件。

超低温冰箱：储存温度-80°C，容量500L，功能为长期保存样本和试剂保证稳定性。

自动化移液平台：多通道移液器集成，精度±1μL，功能为标准化试剂添加减少人为误差。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件