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动物源食品链霉素残留酶联免疫检测

发布时间：2025-06-04

关键词：动物源食品链霉素残留酶联免疫试验仪器,动物源食品链霉素残留酶联免疫检测标准,动物源食品链霉素残留酶联免疫检测周期

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来源：北京中科光析科学技术研究所

文章简介：

检测项目链霉素残留量、双氢链霉素残留量、链霉素与双氢链霉素总量、链霉素代谢物、链霉素特异性结合物、游离链霉素、结合态链霉素水解产物、牛奶中链霉素残留、牛肉中链霉素残留、猪肉中链霉素残留、禽肉中链霉素残留、羊肉中链霉素残留、动物肝脏中链霉素残留、动物肾脏中链霉素残留、脂肪组织中链霉素残留、蜂蜜中链霉素残留、鸡蛋中链霉素残留、鸭蛋中链霉素残留、鱼肌肉中链霉素残留、虾肌肉中链霉素残留、蟹肉中链霉素残留、贝类软组织链霉素残留、乳粉中链霉素残留、奶酪中链霉素残留、黄油中链霉素残留、发酵乳制品中链霉素残留、动物饲料中

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检测项目

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检测范围

生鲜牛乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳、全脂乳粉、脱脂乳粉、婴幼儿配方乳粉原料乳酪蛋白粉原料乳清蛋白粉原料牛初乳粉原料发酵乳酸奶乳酸菌饮料奶油黄油稀奶油炼乳冰淇淋雪糕牛肉牛腩牛腱牛排牛柳牛百叶牛肚牛肝牛肾牛心牛脂肪猪肉猪里脊猪五花猪排骨猪肝猪肾猪肺猪蹄禽肉鸡胸肉鸡腿肉鸡翅鸭肉鸭肝鹅肉鹅肝火鸡肉鸽子肉鸡蛋鸭蛋鹅蛋鹌鹑蛋皮蛋咸蛋蜂蜜蜂王浆蜂花粉蜂胶鱼肌肉草鱼鲤鱼鲫鱼鲈鱼鳜鱼三文鱼金枪鱼罗非鱼鳗鱼虾类南美白对虾斑节对虾罗氏沼虾基围虾小龙虾蟹类中华绒螯蟹梭子蟹青蟹帝王蟹贝类牡蛎扇贝蛤蜊贻贝鲍鱼螺类田螺福寿螺动物饲料配合饲料浓缩饲料预混合饲料精料补充料饲料添加剂肠衣猪肠衣羊肠衣牛肠衣血清血浆尿液

检测方法

酶联免疫吸附试验（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA）是检测动物源食品中痕量链霉素残留的核心筛选技术。其原理基于抗原抗体特异性竞争结合反应。主要步骤包括：1.**样品前处理**：依据不同基质特性（如肌肉组织需匀浆提取，乳品需脱脂除蛋白），采用缓冲液提取目标物。复杂基质常需结合固相萃取（SPE）、液液萃取（LLE）或稀释等手段净化去除干扰物质。2.**包被**：将抗链霉素特异性抗体固定在微孔板孔壁上。3.**竞争反应**：在包被好的微孔中加入经处理的样品提取液（含待测游离链霉素）和酶标记的链霉素抗原（酶标抗原）。样品中的游离链霉素与酶标抗原竞争结合微孔板上的有限抗体位点。4.**洗涤**：彻底洗去未结合的游离物质和酶标抗原。5.**显色**：加入酶底物溶液（如TMB）。与抗体结合的酶标抗原催化底物发生显色反应。6.**终止与测定**：加入终止液终止反应后，使用酶标仪在特定波长（如450nm/630nm）下测定各孔的吸光度值（OD值）。7.**定量分析**：样品中的链霉素浓度与OD值呈负相关。通过绘制标准曲线（已知浓度标准品的OD值），即可计算出样品提取液中链霉素的浓度。结果需根据样品前处理的稀释/浓缩倍数换算为实际样品中的含量。该方法优势在于高通量（一次可处理96孔甚至更多）、灵敏度高（可达ppb级）、操作相对简便快速。但作为免疫学方法，存在交叉反应风险（如与双氢链霉素），阳性结果通常需经色谱-质谱联用技术确证。

检测标准

GB/T21315-2007动物源性食品中青霉素族抗生素残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法(含附录BELISA筛选法)GB/T22969-2008奶粉和牛奶中链霉素、双氢链霉素和卡那霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法(前处理参考)GB/T22983-2008牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素残留量的测定液相色谱-串联质谱法(基质适用性参考)SN/T1777.1-2006动物源性食品中大环内酯类和林可胺类抗生素残留测定方法第1部分：放射受体分析法(免疫学方法参考)SN/T1865-2007进出口动物源食品中甲砜霉素、氟甲砜霉素和酰胺醇类药物代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法(基质适用性参考)SN/T2538-2010进出口动物源性食品中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶和二甲氧甲基苄氨嘧啶残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法(基质适用性参考)农业部1025号公告-14-2008动物源性食品中林可酰胺类药物残留检测酶联免疫吸附法(免疫学方法框架参考)农业部781号公告-4-2006动物源食品中四环素类兽药残留量检测方法(免疫学方法框架参考)ISO/TS27105:2009Milkandmilkproducts--Determinationoflincomycinresidues--Methodusingliquidchromatographyandtandemmassspectrometry(LC-MS/MS)(基质适用性参考)欧盟委员会指令2002/657/ECImplementingCouncilDirective96/23/ECconcerningtheperformanceofanalyticalmethodsandtheinterpretationofresults(性能要求)日本肯定列表制度《食品中の農薬等の残留に係る試験法》畜水産物中の抗生物質試験法(筛选法参考)

检测仪器

1.**酶标仪（MicroplateReader）**：核心设备。用于精确测量微孔板中各孔在特定波长下的吸光度值（OD值）。通常配备450nm主波长和630nm参比波长滤光片以消除干扰。其光学系统精度和稳定性直接影响定量结果的准确性。2.**洗板机（MicroplateWasher）**：用于ELISA实验中的洗涤步骤。通过精确控制洗涤缓冲液的注入量、浸泡时间及抽吸次数/力度，有效去除未结合物质，降低背景干扰和非特异性结合，保证反应特异性。3.**恒温孵育器（Incubator）**：提供稳定且可控的温度环境（通常为25C,37C或特定温度），确保抗原抗体结合反应及酶催化显色反应在最佳温度条件下进行，保证反应动力学的一致性和结果重现性。4.**微量移液器（Micropipettes）**：用于精确移取微量液体（μL级），包括标准品溶液配制、样品添加及试剂添加等关键步骤。其精度和校准状态对实验准确性至关重要。5.**漩涡混合器（VortexMixer）**：用于快速混匀样品提取液或试剂溶液，确保溶液均一性。6.**离心机（Centrifuge）**：用于样品前处理过程中的组织匀浆液分离（如沉淀蛋白）、固相萃取后洗脱液的浓缩干燥复溶或去除提取液中的颗粒杂质。7.**均质器/组织研磨仪（Homogenizer/TissueGrinder）**：用于固体或半固体样品（如肌肉组织、肝脏）的粉碎和均质化处理，确保目标物充分释放到提取溶剂中。8.**氮吹仪/真空浓缩仪（NitrogenEvaporator/VacuumConcentrator）**：在需要浓缩纯化后的样品提取液时使用，通过温和加热并通入氮气或真空负压加速溶剂挥发，达到浓缩目标物的目的。9.**pH计（pHMeter）**：用于准确测量和调整缓冲液或提取液的pH值。pH值是影响抗原抗体结合效率的关键因素之一。10.**天平（Balance）**：精确称量样品重量及化学试剂用量。11.**冰箱与冷冻柜（Refrigerator&Freezer）**：用于储存标准品储备液、酶结合物底物等关键试剂以及待测样品，确保其在规定温度下保持稳定性和活性。