梨疱溃疡病毒鉴定检测

因业务调整，部分个人测试暂不接受委托，望见谅。

检测项目

病毒基因组测序、外壳蛋白免疫分析、核酸杂交检测、RT-PCR扩增、qRT-PCR定量分析、dsRNA分离鉴定、寄主范围测定、症状学观察、组织病理切片、病毒粒子电镜观察、血清学交叉反应测试、传播媒介鉴定、温度敏感性试验、抗血清效价测定、核酸探针设计优化、引物特异性验证、系统进化树构建、重组蛋白表达纯化、单克隆抗体制备、病毒分离培养、接种体活性测试、潜伏期监测、病害严重度分级、环境适应性评估、抗病品种筛选、分子标记开发、核酸提取效率验证、假阳性排除实验、交叉保护试验、基因组重组分析。

检测范围

梨树叶片样本、枝条溃疡组织、果实表皮病斑、砧木形成层样本、根部韧皮部提取物、花芽渗出液、嫁接接口愈伤组织、花粉悬浮液、种子胚乳切片、土壤浸出液样本、灌溉水过滤浓缩物、修剪工具表面拭子、昆虫介体（如蚜虫/叶蝉）整体匀浆液、鸟类排泄物样本、气传孢子捕捉样本、苗圃基质培养物、冷藏贮藏果实样本、离体组培苗茎尖分生组织样本、叶脉透明化处理样本、木质部汁液离心沉淀物、树皮刮取物超薄切片样本、果园周边杂草根系样本、花粉管显微穿刺样本、病健交界处过渡区组织块样本组培苗培养基滤膜残留物样本。

检测方法

反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）：通过设计特异性引物扩增病毒RNA依赖的RNA聚合酶基因保守区段，灵敏度可达10拷贝/μl。

双抗体夹心ELISA：采用多克隆抗体包被微孔板捕获病毒颗粒，酶标单抗显色定量分析，适用于大批量样品初筛。

免疫胶体金试纸条：基于纳米金标记抗体与病毒外壳蛋白的快速结合反应，实现田间现场15分钟快速诊断。

透射电子显微镜（TEM）：负染法观察直径28-32nm的二十面体病毒粒子形态特征。

二代测序（NGS）：宏基因组学方法对病组织总RNA进行深度测序，通过生物信息学比对确认病毒全基因组序列。

分子信标探针技术：设计5'端淬灭基团与3'端荧光基团的茎环结构探针，实现qPCR过程中实时特异性检测。

双向电泳-质谱联用：分离纯化病毒蛋白后进行MALDI-TOF分析，比对数据库确认外壳蛋白特征肽段。

检测标准

GB/T35342-2017植物病毒检疫鉴定方法梨疱溃疡病毒

SN/T5559-2022进出境植物检疫梨疱溃疡病毒实时荧光RT-PCR检测方法

EPPOPM7/151(1)Pearblistercankerviroid诊断规程

ISO16140-3:2021微生物学方法验证第3部分：植物病原体分子检测协议验证

NY/T401-2000果树无病毒母本树和苗木检疫规程

GB/T28068-2011柑桔溃疡病菌检疫鉴定方法（参考条款）

ISPM27国际植物检疫措施标准诊断规程制定准则

T/CATCM011-2020中药材病虫害分子检测技术规范

AOACOfficialMethod2008.09PlantVirusDetectionUsingReal-TimePCR

AS5011.15-2004食品微生物学第15部分：植物病原体的检测与计数（通用原则）

检测仪器

实时荧光定量PCR仪：ABIQuantStudio系列设备支持TaqMan探针法实现病毒核酸绝对定量分析。

全自动核酸提取工作站：MagMAXTM系统通过磁珠法完成96孔板高通量RNA纯化。

酶标仪：BioTekSynergyH1具备450nm/630nm双波长吸光度读取功能。

超薄切片机：LeicaUC7制备80nm厚度的包埋组织切片用于电镜观察。

冷冻离心机：Eppendorf5430R实现4℃条件下病毒颗粒的梯度离心富集。

生物分子相互作用仪：BiacoreT200通过表面等离子共振技术测定抗体亲和力常数。

超低温冰箱：ThermoScientificTSX系列维持-80℃长期保存病毒分离株。

全自动电泳系统：Agilent4200TapeStation进行核酸完整性及浓度质控分析。

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件