肠道病毒EV71检测

因业务调整，部分个人测试暂不接受委托，望见谅。

检测项目

肠道病毒EV71检测体系包含三大核心模块：病原体核酸检测、特异性抗体检测及病毒生物学鉴定。核酸检测通过RT-PCR技术靶向VP1基因保守区实现病毒RNA定性/定量分析；血清学检测采用ELISA法测定IgM/IgG抗体效价；病毒分离培养需在BSL-2实验室进行人横纹肌肉瘤（RD）细胞系接种观察细胞病变效应（CPE）。

补充项目包括：

1. 基因测序分型：针对VP1全长基因进行系统进化分析

2. 中和抗体试验：评估疫苗免疫后的保护性抗体水平

3. 多重病原联检：与柯萨奇病毒A16等常见肠道病毒鉴别诊断

检测范围

本检测方案适用于以下临床及公共卫生场景：

1. 手足口病疑似病例的病原学确诊

2. 无菌性脑膜炎/脑炎患者的病因溯源

3. 重症病例治疗过程中的病毒载量监测

4. 聚集性疫情暴发的流行病学调查

5. 疫苗临床试验免疫效果评价

6. 院感控制中的环境样本筛查

典型样本类型包括：

- 临床样本：咽拭子（发病3日内）、肛拭子（发病5-7日）、脑脊液（神经症状期）

- 生物样本：急性期与恢复期双份血清（间隔2-4周）

- 环境样本：物体表面拭子、污水浓缩液

检测方法

标准操作流程严格遵循WS 588-2018《手足口病诊断》及WHO肠道病毒实验室指南：

1. 核酸提取：采用磁珠法全自动核酸提取仪处理样本

2. RT-qPCR：使用经CFDA认证的试剂盒（探针法），循环阈值（Ct值）≤38判定阳性

3. IgM捕获ELISA：包被抗人μ链单克隆抗体捕获血清IgM

4. 微量中和试验：固定病毒量（100TCID50）与系列稀释血清反应

5. 二代测序：针对疑难样本进行宏基因组学分析

质量控制要点包括：

- 每批次实验设置阴性对照（无模板对照）与阳性对照（体外转录RNA）

- PCR扩增效率要求90-110%，R²值≥0.98

- ELISA试验OD值需在校准曲线线性范围内（0.1-2.5）

- 细胞培养传代不超过第10代

检测仪器

标准化实验室应配置以下设备系统：

1. 核酸扩增平台：ABI 7500实时荧光定量PCR仪（配套Fast7500模块）

2. 血清学分析系统：BioTek Synergy H1多功能酶标仪

3. 生物安全设备：BSC-II级生物安全柜（符合EN12469标准）

4. 细胞培养体系：CO₂恒温培养箱（温度波动±0.5℃）

5. 辅助设备群组：包括低温高速离心机（≥12,000×g）、核酸浓度测定仪（波长260/280nm）、超低温冰箱（-80℃±3℃）

仪器校准维护要求：

- PCR仪每年进行温度梯度验证（孔间温差≤0.5℃）

- 酶标仪每月开展光路校准（滤光片精度±2nm）

- 生物安全柜每季度完成气流速度测试（进风风速≥0.5m/s）

- 离心机每半年实施转子动平衡校正

检测流程

1、咨询：提品资料(说明书、规格书等)

2、确认检测用途及项目要求

3、填写检测申请表(含公司信息及产品必要信息)

4、按要求寄送样品(部分可上门取样/检测)

5、收到样品，安排费用后进行样品检测

6、检测出相关数据，编写报告草件，确认信息是否无误

7、确认完毕后出具报告正式件

8、寄送报告原件